貨號 | 規(guī)格 | 發(fā)貨時間 |
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800T/盒 [¥380.00]
:¥380.00
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現(xiàn)貨
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產(chǎn)品簡介
Bradford蛋白濃度測定方法,是常用的經(jīng)典蛋白濃度檢測方法,在酸性條件下,考馬斯亮藍G250染料能與蛋白質(zhì)的堿性和芳香族氨基酸迅速結(jié)合,可通過檢測溶液595nm處吸光值,計算蛋白質(zhì)濃度,吸光值與蛋白質(zhì)濃度在一定范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。經(jīng)典Bradford法與BCA法相比,可以兼容更高濃度的還原劑,并且檢測速度極快,但卻無法兼容蛋白提取時常用的去垢劑,而本試劑盒在保留Bradford法原有優(yōu)點的同時,能夠兼容各種常用去垢劑。
本試劑盒Bradford檢測試劑溶液呈綠色,在與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{色,顏色隨蛋白濃度增加而逐漸加深。本試劑盒在測定蛋白質(zhì)濃度時,可以兼容濃度1% SDS、1% NP-40、1% Triton X-100、1% Brij35和1% Tween 20等多種去垢劑,而且兼容我公司現(xiàn)有的所有蛋白裂解液。本試劑盒經(jīng)過精心優(yōu)化,可在上述去垢劑存在條件下,蛋白質(zhì)樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品BSA濃度在0.1-0.5mg/ml范圍內(nèi),標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值可在0.995以上。
產(chǎn)品優(yōu)勢
兼容性好,可兼容常用去垢劑和蛋白裂解液
結(jié)果穩(wěn)定,1小時內(nèi)都可以進行檢測
快速檢測,5分鐘即可完成蛋白定量時間
結(jié)果準(zhǔn)確,線性相關(guān)性好,斜率高
實驗數(shù)據(jù)
圖1. 上圖是在去垢劑和蛋白裂解液存在時,蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的實際檢測結(jié)果。線性良好標(biāo)準(zhǔn)曲線R2值可在0.995以上。
圖2.上圖是RIPA強蛋白裂解液稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液時,每隔5min檢測吸光值結(jié)果。結(jié)果表明本產(chǎn)品在1小時內(nèi)的吸光值變化很小。
保存條件
4℃保存,一年有效。標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液BSA長期不用可放置在-20℃保存。
注意事項
1. 當(dāng)去垢劑濃度大于1%時,部分去垢劑和去垢劑組合仍然適用于Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型),但可能會出現(xiàn)斜率降低的現(xiàn)象,影響結(jié)果準(zhǔn)確度。
2. 本產(chǎn)品長時間不用會有少量沉淀產(chǎn)生,在使用前請將檢測試劑上下翻轉(zhuǎn)混勻。
3. 本產(chǎn)品建議蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍是0.1-0.5mg/ml,如果因?qū)嶒炐枰獢U大蛋白標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍后出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不好的現(xiàn)象,可將蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品與檢測試劑的體積比例改為5:300。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作步驟
1. 制備蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液
將20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液按照下表進行稀釋,注意在稀釋時盡量保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液與待檢測蛋白樣品的溶劑相同,在稀釋時要保證每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液都充分混勻。以下表格內(nèi)的體積適用于96孔酶標(biāo)板測定,如使用分光光度計測定,按實際需要擴大溶液體積。
編號 |
稀釋液體(ul) |
蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液體積 |
最終濃度(mg/ml) |
A |
97.5 |
從蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液BSA取2.5ul |
0.5 |
B |
20 |
從A管取80ul |
0.4 |
C |
20 |
從B管取60ul |
0.3 |
D |
20 |
從C管取40ul |
0.2 |
E |
20 |
從C管取20ul |
0.15 |
F |
20 |
從D管取20ul |
0.1 |
G |
20 |
0 |
0 |
2. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)和蛋白樣品濃度測定
1) 取10ul上步驟已稀釋好的不同濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液依次加入到96孔酶標(biāo)板中;
2) 取10ul待測蛋白樣品加入到96孔酶標(biāo)板中。注意如蛋白樣品濃度過大,需要用同蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液相同的溶液稀釋蛋白樣品。
3) 每孔加入300ul Bradford蛋白定量試劑(去垢劑兼容型)。用手輕彈酶標(biāo)板混勻,室溫放置3-5min,注意不可以使用酶標(biāo)儀震板功能,防止液體灑出污染機器。
4) 設(shè)置酶標(biāo)儀測定595nm的吸光值,以不含BSA的吸光值做為空白對照。
5) 以蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,注意將零點去除,得出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性公式及R2值。
6) 按照上述步驟所得公式,根據(jù)所測得的蛋白樣品吸光值,計算蛋白樣品的濃度。
7) 如使用分光光度計測定,可根據(jù)實際需要擴大溶液體積,保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品與Bradford蛋白定量試劑的體積比為10:300,例如,如果需要1.5ml,可取蛋白樣品50ul,Bradford蛋白定量試劑1.5ml。
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